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董红红

铜虫 (小有名气)

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专业: 植物病理学

[求助] pcambia1304植物表达载体构建已有1人参与

最近打算构建一些植物表达载体，用的载体是pcambia1304，遇到的问题如下：
1插入的片段应该是在多克隆位点处还是35S启动子后面？
2.如果插入到多克隆位点的话基因没有启动子，前面只有一个lac启动子和操纵子，这个基因能正常表达吗？
3.如果插在35S启动子后面，那么原先35S后面的GFP和GUS还能正常表达吗？
4。如果是自己在多克隆位点处引入基因的启动子，那加基因自身的启动子好还是加一个强启动子就可以？加什么启动子比较好？
还请路过的大神指点，不甚感激

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1楼 2018-11-13 01:13:01

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梦弋惊龙

铁杆木虫 (著名写手)

***

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【答案】应助回帖

该植物过表达质粒，含有两个35S启动子，一个是增强型35S，其主要目的就是在植物中增强目的基因的表达，另一个35S启动子的目的是启动GFP和GUS报告基因的，所以两个35S启动子目的不同。片段要插入多克隆位点，该质粒含有lacZa，是可以进行蓝白斑筛选的。该质粒在MCS上下游是含有M13通用引物序列的，可以使用M13测序！