| 查看: 228 | 回复: 0 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
挥汗如雨至尊木虫 (职业作家)
|
[交流]
求助双链RNA浓度测定问题
|
||
|
请教各位高手，我以PCR产物为模板，做完体外转录，退火形成双链RNA（dsRNA）后，加DNase和RNase进行核酶消化，降解PCR产物模板和单链RNA，然后纯化dsRNA，测定260 nm处的OD值计算合成的dsRNA浓度。 但我发现有些人是利用乙醇沉淀的方法纯化dsRNA，测定260 nm处的OD值计算合成的dsRNA浓度的，请问这样做测出的浓度合理吗？乙醇沉淀能否去除核酶消化和剩余的dNTP？如果去除不了，核酶消化和剩余的dNTP对测定的OD值是不是影响很大？这样测出的dsRNA浓度应该偏大吧？或者说如果不去除dsRNA以外的核酸片段或dNTP,测出的ＯＤ值和合成dsRNA反应前的ＯＤ值没有什么区别？如果利用过柱纯化的方法是否能去除剩余的，核酶消化和剩余的dNTP？ （乙醇沉淀方法：PCR结束后，加入0.1倍体积醋酸钠（3M，Ph5.2）和2.5倍体积的无水乙醇，冰浴10 min，12000 rpm离心10 min；轻轻倒掉上清，再加500 μl 75%乙醇洗涤。4℃，7500 rpm离心5 min，再倒掉上清，干燥沉淀；加入无菌水溶解纯化的PCR产物，紫外分光光度计测定260 nm处的吸光度，计算反应产物浓度） |
回复此楼» 猜你喜欢
青椒八年已不青，大家都被折磨成啥样了？
已经有11人回复
-
限项规定
已经有9人回复
-
免疫学博士有名额，速联系
已经有4人回复
-
交叉科学部支持青年基金，对三无青椒是个机会吗？
已经有5人回复
-
国家基金申请书模板内插入图片不可调整大小?
已经有6人回复
-
国家级人才课题组招收2026年入学博士
已经有5人回复
-
Fe3O4@SiO2合成
已经有6人回复
-
青年基金C终止
已经有4人回复
-
26申博求博导推荐-遥感图像处理方向
已经有4人回复
-
西南交通大学国家级人才团队2026年博士研究生招生（考核制）—机械、材料、力学方向
已经有3人回复
