24小时热门版块排行榜    

查看: 157  |  回复: 3
当前主题已经存档。

含笑~

银虫 (正式写手)

[交流] PCR优化

50.00UL体系用20uM的引物1.00UL,Taq 1.25U。结果:目的条带很亮(约200kb),出现约400bp的非特异条带,有引物二聚体。(第一张图)
50.00UL体系用20uM的引物0.50UL,Taq 1.25U。结果:目的条带比较亮,400bp非特异减少,有引物二聚体。(第二张图)
50.00UL体系用20uM的引物0.25UL,Taq 1U。结果:无400bp非特异,引物二聚体也没有了,但目的条带不够亮。(第三张图)
PS 为了减少非特异,用过TOUNCHDOWN,但目的条带很弱,引物二聚体明显。根据以上结果,怎样才能得到更好的PCR效果呢。

[ Last edited by 含笑~ on 2009-4-14 at 13:08 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

在克隆实验中,dimer和非特异条带是很正常的,反正要切胶回收,只要目的条带够浓就可以了,其他有杂带无所谓,只要能分开。

至于想做定量或半定量PCR,则最好先从引物入手,引物设计不好怎么优化都没用
2楼2009-04-14 10:37:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spring0304

木虫 (小有名气)

对于目的片段,直接割胶回收!
3楼2009-04-14 10:57:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

含笑~

银虫 (正式写手)

回复三磷酸腺苷和spring0304

谢谢你们的回复!我是准备分析样品的微生物多样性,先扩16S rDNA中的V3区,然后跑变性梯度凝胶电泳(DGGE),跑DGGE后再切胶回收。以上的图片是Agarose 胶的,是在跑DGGE前先跑agarose 看看的,不直接回收。不知是否可以先回收agarose胶之后再跑DGGE?
4楼2009-04-14 13:18:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 含笑~ 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +5 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 6/300 2026-03-02 09:36 by 破风α
[考研] 材料学调剂 +10 提神豆沙包 2026-02-28 12/600 2026-03-02 09:26 by 李老师!
[考研] 材料工程专硕283求调剂 5+3 ,!? 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:04 by 材子momo
[考研] 322求调剂 +3 熊境喆 2026-03-01 3/150 2026-03-02 08:44 by houyaoxu
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分,求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 0805总分292,求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[基金申请] 刚录用,没有期刊号,但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
请填处理意见