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penguin3932金虫 (正式写手)
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硅胶柱层析，如何选择合适的洗脱溶剂？如何装柱？上样？
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| 硅胶柱层析，如何选择合适的洗脱溶剂？如何装柱？上样？ |
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2楼2009-04-11 13:14:41
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装柱一般用起始溶剂，也就是梯度的最初极性。对于硅胶柱来说，一般是石油醚、氯仿等弱极性溶剂。 装柱可以有湿法或干法，前者比较常用。一般是用初始溶剂将硅胶混悬，慢慢加入玻璃柱中（柱子里预先加入一小片棉花防止硅胶从底部泄漏，如果是带塞板的柱子就不用了），注意不要进气泡。尽量在沉降前全加完，否则会分层。 待沉降完，再上样。 上样一般也分湿法和干法。对于硅胶干法常用一些。就是用一定量硅胶与样品溶液（最好完全溶解，实在不行混悬也可）混合，挥干溶剂之后，就可以加入装好的柱子顶端了。 [ Last edited by leonard187 on 2009-4-11 at 14:13 ] |
3楼2009-04-11 14:08:04
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karl2100(金币+1,VIP+0):3Q 5-25 20:54
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干法装硅胶柱经验 一边装一边两边均匀用力拍打，或者装完后用真空泵抽一下。 我们用干法装柱都是，把硅胶装进去之后，拿洗耳球稍微敲打几下后，拿水泵抽紧，边抽边用洗耳球敲柱，这样可以把柱子装的非常紧凑，尽量排空空气，这样上洗脱剂的时候就不会那么容易断开。装柱子下面的活塞一定要打开。 干法装柱子下面的活塞一定要打开 干法装柱先保证柱子清洗干净，玻璃柱内壁光滑（水洗后不挂珠），柱底安装了砂漏或者以脱脂棉替代，活塞打开保证空气流通。 将经过预先计算、秤量好的硅胶一次性沿漏斗倒入柱内。如果不是预先计算秤量好硅胶，则在装柱时犹豫不决，容易被柱内暴腾的硅胶粉迷惑，不能确认已经装到了多高的柱高度。两次甚至三次、多次补加硅胶容易导致装柱断层。 一次装柱后，在柱下端左右手同时用胶块等物（柔和又有一定硬度的即可）敲打柱子。不断敲打，同时观察硅胶上端表面的变化，保证硅胶面平行下降，直到硅胶面落实不再有气体在硅胶面“冒泡”为止。 样品溶液用一定体积硅胶（硅胶粒度可小于装柱硅胶）拌匀后，凉干。均匀铺盖在柱子上表面（一般2cm左右，也要根据柱高、柱直径来确定），稍微敲打柱壁使上样硅胶踏实。 基本装柱完成了。 注意一定得戴口罩啊 |
7楼2009-05-25 15:53:31