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penguin3932金虫 (正式写手)
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硅胶柱层析,如何选择合适的洗脱溶剂?如何装柱?上样?
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| 硅胶柱层析,如何选择合适的洗脱溶剂?如何装柱?上样? |
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2楼2009-04-11 13:14:41
leonard187
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装柱一般用起始溶剂,也就是梯度的最初极性。对于硅胶柱来说,一般是石油醚、氯仿等弱极性溶剂。 装柱可以有湿法或干法,前者比较常用。一般是用初始溶剂将硅胶混悬,慢慢加入玻璃柱中(柱子里预先加入一小片棉花防止硅胶从底部泄漏,如果是带塞板的柱子就不用了),注意不要进气泡。尽量在沉降前全加完,否则会分层。 待沉降完,再上样。 上样一般也分湿法和干法。对于硅胶干法常用一些。就是用一定量硅胶与样品溶液(最好完全溶解,实在不行混悬也可)混合,挥干溶剂之后,就可以加入装好的柱子顶端了。 [ Last edited by leonard187 on 2009-4-11 at 14:13 ] |

3楼2009-04-11 14:08:04

4楼2009-04-11 14:21:56
jiandan626201
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karl2100(金币+1,VIP+0):3Q 5-25 20:54
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干法装硅胶柱经验 一边装一边两边均匀用力拍打,或者装完后用真空泵抽一下。 我们用干法装柱都是,把硅胶装进去之后,拿洗耳球稍微敲打几下后,拿水泵抽紧,边抽边用洗耳球敲柱,这样可以把柱子装的非常紧凑,尽量排空空气,这样上洗脱剂的时候就不会那么容易断开。装柱子下面的活塞一定要打开。 干法装柱子下面的活塞一定要打开 干法装柱先保证柱子清洗干净,玻璃柱内壁光滑(水洗后不挂珠),柱底安装了砂漏或者以脱脂棉替代,活塞打开保证空气流通。 将经过预先计算、秤量好的硅胶一次性沿漏斗倒入柱内。如果不是预先计算秤量好硅胶,则在装柱时犹豫不决,容易被柱内暴腾的硅胶粉迷惑,不能确认已经装到了多高的柱高度。两次甚至三次、多次补加硅胶容易导致装柱断层。 一次装柱后,在柱下端左右手同时用胶块等物(柔和又有一定硬度的即可)敲打柱子。不断敲打,同时观察硅胶上端表面的变化,保证硅胶面平行下降,直到硅胶面落实不再有气体在硅胶面“冒泡”为止。 样品溶液用一定体积硅胶(硅胶粒度可小于装柱硅胶)拌匀后,凉干。均匀铺盖在柱子上表面(一般2cm左右,也要根据柱高、柱直径来确定),稍微敲打柱壁使上样硅胶踏实。 基本装柱完成了。 注意一定得戴口罩啊 |
7楼2009-05-25 15:53:31














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