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生物搬运工

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2018-10-10 01:06:53
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defte

新虫 (小有名气)
有试剂盒，

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2楼2018-10-10 07:00:15
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Summergogo

新虫 (小有名气)
★ ★
生物搬运工(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-10-10 09:06:57
先不加引物做线性扩增，然后再加引物做指数扩增

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3楼2018-10-10 07:17:11
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生物搬运工

禁虫 (初入文坛)
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4楼2018-10-11 17:56:17
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niil

金虫 (正式写手)
你详细描述下你的实验过程啊，这样才能找到问题

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Stop fighting,let it flow.
5楼2018-10-11 19:41:47
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Summergogo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 生物搬运工 at 2018-10-11 17:56:17
什么是指数扩增呀，touch down吗
...

1.先将对应的单个片段挨个P出来，点胶确定对应的每天带都已经p出来了。可以回收，也可直接用这一步的反应液进行下一步。
2.加每个p出来的片段取100ng左右(这个得具体去试，也不一定就是这个浓度)，加到反应液里，不加引物，直接定容至要P的反应体系。进行pcr 。这一部就是

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6楼2018-10-12 07:34:18
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Summergogo

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by Summergogo at 2018-10-12 07:34:18
1.先将对应的单个片段挨个P出来，点胶确定对应的每天带都已经p出来了。可以回收，也可直接用这一步的反应液进行下一步。
2.加每个p出来的片段取100ng左右(这个得具体去试，也不一定就是这个浓度)，加到反应液里，不 ...

这一部就是线性扩增，目的是为了让片段之间进行一个over lap..会有一部分的片段互相进行overlap.

3.去上一步骤反应液，100ng左右(具体浓度也得自己摸索)，加入引物(头部的上游引物，尾部的下游引物)。然后进行pcr。  这一步是指数扩增，大量获得你要的产物。

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7楼2018-10-12 07:37:44
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