24小时热门版块排行榜    

查看: 2739  |  回复: 13

yougu1314

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨默格

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2018-09-04 11:49:26
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

balalalabala

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
yougu1314(渊博震天代发): 金币+5, 鼓励回帖交流 2018-09-04 15:21:26
我遇到过同样的问题,应该是标签为暴露在蛋白的表面,所以没办法纯化,试试gst融合蛋白表达,还可以试试重折叠,还有硫酸铵沉淀,还有就是把his标签和蛋白的link加长看能不能暴露在外面。

发自小木虫Android客户端
3楼2018-09-04 12:23:04
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

allegory

禁虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

4楼2018-09-04 16:52:15
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yougu1314

禁虫 (小有名气)

送红花一朵
本帖内容被屏蔽

5楼2018-09-05 15:14:43
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泡沫12

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
可以试一下GST标签的载体

发自小木虫IOS客户端
6楼2018-09-06 21:20:59
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maoniuniu

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
His标签纯化和阴离子交换柱原理不同,不可同时比较。如果是His标签WB检测正确表达,且上清中量很大,可溶性很高,同时纯化步骤有对照,排除了柱料失效的问题,确实可以考虑标签是否暴露充分的问题,但是如果是标签暴露不充分,理论上换别的标签也是同样的问题,GST和MBP这些标签可帮助蛋白折叠,提高可溶性,但无法解决标签暴露问题,可以考虑改变标签的融合位置,比如N或C,加长linker也是优先选择的方法,甚至在充分了解蛋白结构的前提下可考虑加在一级结构的内部。如果阴离子交换不挂柱,同样在排除前述问题后,包括你蛋白表达没问题,你柱子没问题,那么要考虑使用的阴离子柱类型是否合适,这种纯化方式与你的标签暴露与否没有太直接的关系

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2018-09-07 09:55:17
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maoniuniu

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
对了,像楼上说重折叠也是可以的,即在尿素或盐酸胍变性的前提下进行纯化,GE的镍柱都是支持变性条件下纯化的,但是这种纯化方式不推荐优先选择,实在没办法才会去做,因为变性后的复性是个很麻烦的事,除非你不需要有活性的蛋白,可以不用考虑复性,只要可溶就行。另,硫酸铵沉淀一般用在最开始对目标蛋白进行粗分离,粗沉淀,最后仍然是绕不开后续亲和纯化的

发自小木虫Android客户端
8楼2018-09-07 10:01:11
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gfc7758

禁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2018-09-07 16:27:31
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yougu1314

禁虫 (小有名气)

送红花一朵
本帖内容被屏蔽

10楼2018-09-07 22:28:15
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yougu1314 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见