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想问下有没有人在设计引物时，以环装质粒为模板6300bp，几乎要扩增下来整个片段，然后引物r为61bp，gc含量62.3%，Tm99.8，f为41bp，gc含量53.7%，Tm86，然后用了高保真和pcr enhancer，结果有个1300左右的条带， 想问下是什么问题 @biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端 |
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4楼2018-07-28 00:01:13
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明白了，你加的6his或者其他酶切位点或保护碱基都不要算，Tm要以严格与模板碱基互补配对的靠近3'端计算，一般这段序列不超过30bp就够了。我猜你程序退火高了。以质粒做模板相比基因组是非常好扩增的实验，注意不要加太多质粒模板吧 发自小木虫Android客户端 |
5楼2018-07-28 00:07:32