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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » race菌液测序后如何知道这是我需要的序列
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暴走的小鱼干

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cmjll at 2018-07-30 14:32:15
会不会是你菌液PCR扩反了，扩成载体序列了...

这？我也没法控制它啊

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11楼2018-07-31 09:53:07
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暴走的小鱼干

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Agonilb at 2018-07-30 18:00:19
测序后，和你的上下游引物比对，你的上游引物（自己的引物）到扩出来的序列之间应该有一部分和你的已知序列重叠，用三个（上下游引物，已知序列）比对看看

我发现有个序列，有上游有下游，但是中间的序列我也不知道是哪儿的东西，不是我已知的片段

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12楼2018-07-31 09:54:09
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aliaaxmu2016

金虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-07-23 16:42:36
特异性引物是通过已知的一部分序列来设计的，按道理来说应该是一个特异性引物，一个upm引物，而你没找到upm引物会不会发生了单向扩增？

upm是什么意思，大神？
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13楼2018-07-31 10:55:36
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aliaaxmu2016

金虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 暴走的小鱼干 at 2018-07-24 18:38:13
菌液跑pcr2000多啊，但是测序出来却只有一两百
...

测序引物不特异，建议重新设计：把需要测序的整体都放进去（包括载体），以免引物有两个以上引发位点
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14楼2018-07-31 10:57:28
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Agonilb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by aliaaxmu2016 at 2018-07-31 10:55:36
upm是什么意思，大神？...

Upm是做3-race的下游通用引物

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15楼2018-07-31 12:31:05
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5斤亲戚

新虫 (初入文坛)
请问你有没有做阳性对照

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16楼2019-03-16 09:41:33
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