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DLLB

金虫 (小有名气)

学习了
11楼2009-05-26 13:33:13
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~


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DH5α做表达载体得到的表达产物较低,一般都用BL21。
平和悦衲!
12楼2009-05-26 13:50:27
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我常常把连接产物直接转化BL21的,有时还直接在平板上加涂IPTG,我做的是GFP,直接通过菌落颜色筛选阳性克隆,很方便的哦!
13楼2009-05-26 14:40:33
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humants

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般连接后的产物最好先转入克隆菌,然后提质粒再转入表达菌,因为连接产率有的时候很低,直接转入表达菌会因为表达产物对宿主有毒性而导致细胞死亡,从而影响转化率,而转入克隆菌株就不会存在这种问题。
14楼2009-05-26 17:18:53
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jqq1985

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
基本上没有什么不同,但是如果用的是PET系列的质粒就有区别了。克隆用不带DE3的菌株,而表达用带DE3的菌株。有时候为了省事克隆和表达都能用带DE3的菌株,但是有时候表达的蛋白有毒性,这样的克隆有可能长不出来,最好分开。不是Pet载体的就没什么差别了。
15楼2009-05-26 19:24:11
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
TG1做克隆还可以!但是不适合长期保存菌株!TG1生长快!大的载体很容易丢失!
麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起,么有鱼丸粗面。。那,我要鱼丸么有鱼丸那,我要粗面…………么有粗面那,我要鱼丸粗面……………………
16楼2009-05-27 14:50:33
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bennyg

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
学习了,感谢各位大大。
努力,技巧
17楼2009-05-27 15:26:51
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