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SYBR green体系荧光定量PCR
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(1)最近在做SYBR green体系荧光定量PCR,标曲建立过程中,发现同一个样品的三个重复间有的出现一个峰,有的出现两个峰甚至是多个峰,并且稀释倍数越大,这种情况越显著,并且随着稀释倍数的增加,TM值由88.9变成81.66这是什么原因呀? (2)在建立标曲时,又同时做了几个目的样品,发现标曲溶解曲线的TM值为88.9,而样品溶解曲线的TM值为81.38,样品的溶解曲线没有特异性扩增。这样正常吗? (克隆转化,阳性克隆鉴定均没有问题) |
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