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哒哒哒小马蹄

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体连接与表达 已有1人参与

我扩一个1400bp的猪的基因,从cdna上扩,用了1*pfu,primerstar,还有擎科生物的高保真都没扩出来,然后用了三段式融合pcr,扩出了正确的条带,然后连接pegfpc3载体后也表达了,由于放假就没有接着做细胞实验。开学又用此质粒去转化出一批新的质粒,一直测序,反复突变,换了两家测序公司还是这样,我是选择重新扩还是怎样啊,求助,而且想知道为什么会反复突变?
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a13515517892

木虫 (小有名气)

我就想问开始扩出来连载体的质粒有测序吗,如果没有,你咋知道不存在突变的。

发自小木虫IOS客户端
4楼2018-07-10 13:05:11
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果是用先前连接pegfpc3正确的重组质粒去抽提之后再测序的话,基本可以排除突变了。因为生物体内的突变率很低,怀疑是不是测序公司的技术问题?
2楼2018-07-10 12:36:47
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a13515517892

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-07-10 12:36:47
如果是用先前连接pegfpc3正确的重组质粒去抽提之后再测序的话,基本可以排除突变了。因为生物体内的突变率很低,怀疑是不是测序公司的技术问题?

你的这个回答感觉不合理,一家公司技术有问题还能测出来质粒突变啊,既然测序技术有问题可以突变,那菌株本身也可以突变吧,何况换了两家公司,都是反复突变。

发自小木虫IOS客户端
3楼2018-07-10 13:04:05
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by a13515517892 at 2018-07-10 13:04:05
你的这个回答感觉不合理,一家公司技术有问题还能测出来质粒突变啊,既然测序技术有问题可以突变,那菌株本身也可以突变吧,何况换了两家公司,都是反复突变。
...

每次测序返还回来的结果显示都是一个地方突变咩?
5楼2018-07-10 13:05:54
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