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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 基因回补的验证
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yoyoyou

新虫 (小有名气)

[交流] 基因回补的验证

请教，做缺失突变株的基因回补有两个月了，回补株的验证总是出现问题，首先，说一下我用的验证方法：1、重组质粒用pET-28a，带有卡那霉素抗性，回补株用卡那平板进行筛选；2、利用目的基因引物进行菌液PCR，看能否扩增出目的条带；3、另外设计一组目的基因外侧的长片段引物，提取DNA后进行PCR，看是否出现长片段的条带。现在我的主要问题出现在第3个验证，长片段总是P不出来，请教各位，有没有相似经历，有的话怎么解决？或者有什么更好的验证方法可以建议一下？谢谢各位啦
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1楼2018-07-04 16:41:25
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
33楼: Originally posted by yoyoyou at 2018-07-04 19:39:25
再追问一句，我的缺失突变株是用了氯霉素基因替代目的基因，回补的话，利用目的基因引物可以扩增出目的条带，但是长片段却不可以，这是为什么呢...

可能还有残留的质粒，不在基因组。
你知道你需要做出什么样的结果，你也知道办法。不要让问题调查本身成为你的研究项目，多尝试不同办法，小心求证吧
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34楼2018-07-05 22:24:46
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大大293楼
2018-07-04 17:06   回复  
yoyoyou(金币+1): 谢谢参与
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117921559112楼
2018-07-04 17:31   回复  
yoyoyou(金币+1): 谢谢参与
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