应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 基因回补的验证
51/1返回列表
查看: 4269  |  回复: 37
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yoyoyou

新虫 (小有名气)

[交流] 基因回补的验证

请教，做缺失突变株的基因回补有两个月了，回补株的验证总是出现问题，首先，说一下我用的验证方法：1、重组质粒用pET-28a，带有卡那霉素抗性，回补株用卡那平板进行筛选；2、利用目的基因引物进行菌液PCR，看能否扩增出目的条带；3、另外设计一组目的基因外侧的长片段引物，提取DNA后进行PCR，看是否出现长片段的条带。现在我的主要问题出现在第3个验证，长片段总是P不出来，请教各位，有没有相似经历，有的话怎么解决？或者有什么更好的验证方法可以建议一下？谢谢各位啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2018-07-04 16:41:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yoyoyou

新虫 (小有名气)
引用回帖:
29楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-07-04 18:52:19
验证思路正确。建议有两个：1. southern. 经典实验。2. 多设计几对外侧引物试试。换适合长PCR酶。长远20kb以上就很难了。

再追问一句，我的缺失突变株是用了氯霉素基因替代目的基因，回补的话，利用目的基因引物可以扩增出目的条带，但是长片段却不可以，这是为什么呢
赞一下 回复此楼
33楼2018-07-04 19:39:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 38 个回答
简单回复
大大293楼
2018-07-04 17:06   回复  
yoyoyou(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
117921559112楼
2018-07-04 17:31   回复  
yoyoyou(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
查看全部 38 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭