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野野野花

新虫 (初入文坛)

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专业: 作物种质资源与遗传育种学

[交流] 土壤细菌荧光定量pcr内参基因已有1人参与

新手小白问一下土壤细菌荧光定量pcr内参基因用什么？做一些硝化反硝化细菌和氨氧化细菌的荧光，师兄说用16s，这个内参怎么获得？直接去公司买吗？

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1楼 2018-06-18 19:42:32

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cventbio

新虫 (初入文坛)

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虫号: 9078924
注册: 2018-06-15

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

荧光定量分为探针法和染料法，
你应该选的是染料法吧？
16s的引物获得：途径1，文献参考，确定的样品数据什么菌，对应查阅文献，应该能有16s引物序列。然后找公司合成引物。当然你的目的基因基本也是如此获得引物序列。
途径二，对应菌的序列到数据库取找，找到16s的保守序列并用软件对应设备引物。获得的引物合成后做预实验验证：体系？有无而具体，扩增效率等。目的基因也是如此这般。

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www.cventbio.com 荧光定量、无缝链接、单克隆......

2楼2018-06-21 17:03:33