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汐血玥

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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129楼2019-09-25 10:23:52
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zqs0217

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近一直在做3KDa蛋白的纯化,说真的,太难了,不是tricine-SDS-PAGE胶的问题,是蛋白太小,很难纯化。楼主在制胶上有问题,可以跟你交流下制胶过程中的注意事项。

我用的不是预制胶,用的是索莱宝买的tricine-SDS-PAGE制胶试剂盒,价格应该是比预制胶便宜。前几次制胶后跑胶,都挺方便,但是效果不好。10KDa以下的蛋白条带都看不到,查看文献后,在底层胶中加入适量尿素后,3KDa蛋白marker可以很清楚看到(但是我的目的蛋白还是没有呀)

跑胶也有一些注意事项:
(1)蛋白胶槽内槽为阴极缓冲液,外槽为样机缓冲液;
(2)装完胶后,以20V电压跑20min后再点样;
(3)点完样后,以30V电压跑1 h,之后以100V电压继续跑胶(切记不要将Loading跑出胶,建议离1cm时停止电泳);
(4)跑胶全过程是在冰浴中进行。

希望对你有所帮助~
136楼2020-08-17 15:37:31
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shanql01101楼
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sunglow369132楼
2019-09-27 08:06   回复  
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莫吉托134楼
2019-10-09 13:24   回复  
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姚翔ab135楼
2019-10-09 15:30   回复  
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