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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 微生物、发酵 » Tricine sds page 交流
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汐血玥

禁虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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129楼2019-09-25 10:23:52
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zqs0217

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最近一直在做3KDa蛋白的纯化，说真的，太难了，不是tricine-SDS-PAGE胶的问题，是蛋白太小，很难纯化。楼主在制胶上有问题，可以跟你交流下制胶过程中的注意事项。

我用的不是预制胶，用的是索莱宝买的tricine-SDS-PAGE制胶试剂盒，价格应该是比预制胶便宜。前几次制胶后跑胶，都挺方便，但是效果不好。10KDa以下的蛋白条带都看不到，查看文献后，在底层胶中加入适量尿素后，3KDa蛋白marker可以很清楚看到（但是我的目的蛋白还是没有呀）

跑胶也有一些注意事项：
（1）蛋白胶槽内槽为阴极缓冲液，外槽为样机缓冲液；
（2）装完胶后，以20V电压跑20min后再点样；
（3）点完样后，以30V电压跑1 h，之后以100V电压继续跑胶（切记不要将Loading跑出胶，建议离1cm时停止电泳）；
（4）跑胶全过程是在冰浴中进行。

希望对你有所帮助~
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136楼2020-08-17 15:37:31
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shanql01101楼
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_Shirley106楼
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jingkulou111楼
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wxjack115楼
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aaaran130楼
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Last-ditch131楼
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sunglow369132楼
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小新新9024133楼
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莫吉托134楼
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