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为什么双酶切后测序找不到上游酶切位点？ 已有1人参与
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上游起始密码子前5端加入了BamH1的酶切位点，做了菌落PCR后，强阳性，pcr产物测序结果找orf后做blastp，和预期片段比对率98%，目的片段应该是加上去了。但是，一代测序的结果中找不到酶切位点，更没有酶切位点上游的序列，整个序列可以找到atg但感觉不是原来的起始密码子。下游酶切位点及后面序列都没问题。载体用的是pet-32a原核表达载体，下游有酶切位点，后面就是载体序列。 分析可能：酶的特异性不佳，有星活力。还有别的原因吗？求助，谢谢大神们了～～ 发自小木虫Android客户端 |
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-05-04 07:55:42
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2楼2018-05-03 17:54:10
GRUBBY_WU
铁杆木虫 (著名写手)
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3楼2018-05-03 21:19:57
