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欲鱼与豫鱼

新虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体复性 已有2人参与

我诱导表达出来的包涵体,用8M Urea 在4℃溶解了24h还是没溶解掉是什么原因?再这之后我打算用梯度稀释法进行蛋白复性,8M,6M,4M,2M,0M这样的浓度梯度合适吗,都说蛋白复性是在4M开始,2M结束,要不要在这之间再设置一个浓度梯度呢?这每个浓度梯度透析的时间用多长比较合适呢?
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落雪6

铁杆木虫 (正式写手)

小兵

我们一般是加8M尿素-70度冻融三次,你可以试试!

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2楼2018-04-27 15:12:05
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欲鱼与豫鱼

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 落雪6 at 2018-04-27 15:12:05
我们一般是加8M尿素-70度冻融三次,你可以试试!

这样反复冻融的话,对蛋白没有影响吗,不会降解吗?

发自小木虫IOS客户端
3楼2018-05-03 11:01:24
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chen_xiao_xu

银虫 (正式写手)

设置的可以,先试试,在优化条件。包涵体溶解就那样,不是完全能溶解的,有细胞碎片什么的

发自小木虫Android客户端
4楼2018-05-03 12:49:08
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

您好,尿素不行,就用盐酸胍,也可以尝试结合冻融,也可以加点0.02%的DTT。另外,后面设置的复性梯度可以试试。还有如楼上所说,先确定是没溶,还是部分溶解,还是溶解,剩下的是细胞碎片,祝顺利。
5楼2018-05-03 14:57:24
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503276866

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不溶解可以适当的增加温度,没必要这么低的温度。
没有最好只有更好
6楼2018-05-09 14:29:12
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