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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 包涵体复性
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欲鱼与豫鱼

新虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体复性 已有2人参与

我诱导表达出来的包涵体，用8M Urea 在4℃溶解了24h还是没溶解掉是什么原因？再这之后我打算用梯度稀释法进行蛋白复性，8M，6M，4M，2M，0M这样的浓度梯度合适吗，都说蛋白复性是在4M开始，2M结束，要不要在这之间再设置一个浓度梯度呢？这每个浓度梯度透析的时间用多长比较合适呢？
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1楼 2018-04-27 10:09:12
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落雪6

铁杆木虫 (正式写手)

小兵
我们一般是加8M尿素-70度冻融三次，你可以试试！

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2楼2018-04-27 15:12:05
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欲鱼与豫鱼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 落雪6 at 2018-04-27 15:12:05
我们一般是加8M尿素-70度冻融三次，你可以试试！

这样反复冻融的话，对蛋白没有影响吗，不会降解吗？

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3楼2018-05-03 11:01:24
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chen_xiao_xu

银虫 (正式写手)
设置的可以，先试试，在优化条件。包涵体溶解就那样，不是完全能溶解的，有细胞碎片什么的

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4楼2018-05-03 12:49:08
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

您好，尿素不行，就用盐酸胍，也可以尝试结合冻融，也可以加点0.02%的DTT。另外，后面设置的复性梯度可以试试。还有如楼上所说，先确定是没溶，还是部分溶解，还是溶解，剩下的是细胞碎片，祝顺利。
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5楼2018-05-03 14:57:24
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503276866

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不溶解可以适当的增加温度，没必要这么低的温度。
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没有最好只有更好
6楼2018-05-09 14:29:12
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