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小冀-

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10楼: Originally posted by coin2sky at 2018-04-27 18:52:33
昨天专门看了一本pcr的书,说了这个问题但是我们好像没有这个药,加了DMSO
...

DMSO就是二甲基亚砜啊,没有的话可以买一瓶,不贵
···
11楼2018-04-27 19:19:26
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coin2sky

新虫 (小有名气)

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11楼: Originally posted by 小冀- at 2018-04-27 19:19:26
DMSO就是二甲基亚砜啊,没有的话可以买一瓶,不贵...

那就加过了也没弄出来,我们买的药是索来宝的

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12楼2018-04-27 21:17:02
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wuyiping

新虫 (初入文坛)

设计通用引物18s或者16s,根据你的菌选择,p着试试,能p出来说明除引物以外的一切条件正常。然后再重点关注引物了,设计引物的序列来源正确或者说你的菌有报道过?可以设计引物p这段序列中的一部分,看是否能扩增出来?如果序列来源没问题,那就是引物不好,可以换Taq聚合酶试试,设置退火温度剃度,延长扩增序列的长度

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13楼2018-04-27 23:38:22
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coin2sky

新虫 (小有名气)

送红花一朵
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13楼: Originally posted by wuyiping at 2018-04-27 23:38:22
设计通用引物18s或者16s,根据你的菌选择,p着试试,能p出来说明除引物以外的一切条件正常。然后再重点关注引物了,设计引物的序列来源正确或者说你的菌有报道过?可以设计引物p这段序列中的一部分,看是否能扩增出 ...

谢谢

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14楼2018-04-28 00:05:10
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小冀-

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12楼: Originally posted by coin2sky at 2018-04-27 21:17:02
那就加过了也没弄出来,我们买的药是索来宝的
...

应该跟厂家没关系,十一点都没有P出来吗,有目的条带不清晰还是根本就没有?
···
15楼2018-04-28 13:49:10
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coin2sky

新虫 (小有名气)

16楼2018-04-29 07:24:48
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coin2sky

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15楼: Originally posted by 小冀- at 2018-04-28 13:49:10
应该跟厂家没关系,十一点都没有P出来吗,有目的条带不清晰还是根本就没有?...

一点都没有啊

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17楼2018-04-29 07:25:12
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小冀-

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【答案】应助回帖

你的菌是真菌还是细菌啊,如果是细菌你可以验证一下基因组,用16S通用引物测一下,如果还是没有条带,肯定是基因组的问题,如果是真菌,你可以收集一点菌丝用碱裂解,直接用稀释的裂解液当模板p一下,排除基因组的问题;如果基因组没问题,优化一下pcr温度,如果还是不行,你就换一个试剂试试,或者重新设计一下引物
···
18楼2018-05-02 09:54:27
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coin2sky

新虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 小冀- at 2018-05-02 09:54:27
你的菌是真菌还是细菌啊,如果是细菌你可以验证一下基因组,用16S通用引物测一下,如果还是没有条带,肯定是基因组的问题,如果是真菌,你可以收集一点菌丝用碱裂解,直接用稀释的裂解液当模板p一下,排除基因组的问 ...

已经p出了但是只有1000和2000的条带就是没有1500的

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19楼2018-05-03 09:12:57
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小冀-

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19楼: Originally posted by coin2sky at 2018-05-03 09:12:57
已经p出了但是只有1000和2000的条带就是没有1500的
...

送出去测个序,看是不是你想要的那个菌,如果不是,送个菌液测一下,如果是的话基因组模板应该没问题,就看引物和pcr条件了,如果不是想要的菌,那就模板问题
···
20楼2018-05-03 09:34:30
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