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风筝转转转

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请教!荧光定量PCR测的两个基因,用的一个内参,能不能比较这两个基因表达量的差异 已有1人参与

请教!荧光定量PCR同时测了两个基因,用的一个内参,能不能比较这两个基因表达量的差异???
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wuyiping

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2018-04-27 07:57:14
不能。相对定量怎么计算我就不多说了,我们用了Ct值和2,Ct值的是达到设定的荧光阈值所需的循环数,它与初始模板数有关,2就是理想的指数递增,但是 Ct值真的只与初始模板数有关吗?如果换一条引物呢,那就不一定可吧。可见如果我们用不同的引物,那么比较两个基因的表达量得到的结果可能还不一样。为什么?不同引物pcr的长度不同,每个循环积累的荧光强度也不同,如果你的荧光引物每一轮pcr的长度很长,那么也减小Ct值,那么引物pcr的长度和应该强度呈现正比,我们可以根据这个进行基因全长换算吗?没有看到过相关的参考文献,应该荧光定量pcr的两种数据处理,相对定量走不通,所以你只能选择绝对定量

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3楼2018-04-27 03:01:47
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蝶恋花5280

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-04-27 07:56:54
不能吧,本来两个基因在不同的发育时期和不同的组织部位就没有可比性啊。简单来说我们做定量是通过看两个基因的表达趋势来推测二者是否存在关系,这同样也不能比较这两个基因
2楼2018-04-24 12:49:18
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