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银虫 (初入文坛)

[交流] 一抗的匹配

我刚开始做WB,检测的是鲫鱼的一个蛋白(X),但是1抗没有相匹配的可以买到,文献上有报道说虹鳟鱼的可以和人的多抗反应。所以就买了个兔抗人的一抗。

我的一抗是 兔抗人X(多抗) 二抗是羊抗兔(HRP标记) ECL检测

如果一抗不匹配,后面的也是白做,请问有什么方法可以检测抗原与一抗是否匹配的?第一次做这方面的,希望方法讲得详细点,谢谢了!

[ Last edited by amisking on 2009-5-28 at 15:50 ]
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


headshot(金币+1):谢谢参与
通常wester blotting的一抗都是自己用公司做的一抗血清纯化出来了的,你可以把抗原送给公司,重新注射一个一抗血清
会当凌绝顶,一览众山小
2楼2009-03-18 19:21:20
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headshot

银虫 (初入文坛)

但是我没有纯化的抗原啊,市场上也没有卖的。自己提纯很费时间,纯度如何也很难保证哦~~我再想想办法吧 还是谢谢楼上的了
3楼2009-03-19 12:39:51
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lujun01

银虫 (小有名气)


headshot(金币+1):谢谢参与
做琼扩实验就知道了
4楼2009-05-19 15:38:20
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jiaminl

铁杆木虫 (知名作家)


headshot(金币+1):谢谢参与
路过帮顶
Nevergiveup!
5楼2009-05-19 19:13:10
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋


headshot(金币+1):谢谢参与
做一次也花不了多少时间啊,做好阳性和阴性对照不就行了,抗体公司应该会说明在那些物种上适用在什么物种上不适用吧
第三军团
6楼2009-05-19 19:44:37
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)


headshot(金币+1):谢谢参与
先比较下人和你待检测物种的该蛋白的同源性有多大?第二查询以下你购买的抗体是用什么方法做的:多肽还是全蛋白?第三如果你购买的抗体是纯化过的,那么可以用WB检测下改抗体是否喝你的抗原反应?第四如果你的试验时间安排还比较充分,可以合成一段特异性的小肽做一个抗体进行检测。
以上建议仅供参考,good luck!
52187644
7楼2009-05-22 12:48:44
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