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虫子739

铁虫 (小有名气)

[交流] RT-PCR

RT-PCR需要获得1500bp左右的片段，可是我做了几次反转录都没出现目的条带。用内参引物做的RT-PCR，条带与理论相符合。是因为目的条带太大？还是目的基因的转录水平太低？PCR的条件是不是要很特殊，希望有经验的同仁指点迷津！谢谢！~
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1楼 2009-03-11 16:19:18
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sail000000

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 虫子739 at 2009-3-16 13:09:
谢谢，说的很有道理！资料显示目的基因是能表达的，但目的基因总是扩增无果！难道是我的目的引物不合适？请问大家有没有在调节PCR体系及PCR条件方面的经验。希望做过RT-PCR的高手给点指点，先谢谢了！

这几天比较忙，今天才上来，不知道你P出来没有，如果还没有把你的体系、程序详细的写上来，帮你看看吧！
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9楼2009-03-25 10:07:31
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
sutao1979(金币+1,VIP+0):应该是这样 3-11 17:35
RT检测表达量无需扩这么长，不超过500bp
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2楼2009-03-11 16:28:16
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亦木水

铜虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):辛苦,欢迎常来~ 3-14 00:59
我现在遇到同样的问题，我的目的条带是2.5kb的，已经做了快一个月了
可以检查RNA的纯度
把RT-PCR第一步逆转录所得cDNA电泳，看是否有结果
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2009-03-12 00:06:13
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虫子739

铁虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):鼓励新虫~ 3-14 00:59
cDNA电泳回出现条带吗？要是那样能出来了，我们不就可以不作PCR了？直接做RT就好了。
你那样电泳有结果吗？
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4楼2009-03-13 18:14:54
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