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虫子739

铁虫 (小有名气)

[交流] RT-PCR

RT-PCR需要获得1500bp左右的片段,可是我做了几次反转录都没出现目的条带。用内参引物做的RT-PCR,条带与理论相符合。是因为目的条带太大?还是目的基因的转录水平太低?PCR的条件是不是要很特殊,希望有经验的同仁指点迷津!谢谢!~
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sail000000

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 虫子739 at 2009-3-16 13:09:
谢谢,说的很有道理!资料显示目的基因是能表达的,但目的基因总是扩增无果!难道是我的目的引物不合适?请问大家有没有在调节PCR体系及PCR条件方面的经验。希望做过RT-PCR的高手给点指点,先谢谢了!

这几天比较忙,今天才上来,不知道你P出来没有,如果还没有把你的体系、程序详细的写上来,帮你看看吧!
9楼2009-03-25 10:07:31
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


sutao1979(金币+1,VIP+0):应该是这样 3-11 17:35
RT检测表达量无需扩这么长,不超过500bp
2楼2009-03-11 16:28:16
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亦木水

铜虫 (小有名气)


lwf991229(金币+1,VIP+0):辛苦,欢迎常来~ 3-14 00:59
我现在遇到同样的问题,我的目的条带是2.5kb的,已经做了快一个月了
可以检查RNA的纯度
把RT-PCR第一步逆转录所得cDNA电泳,看是否有结果
3楼2009-03-12 00:06:13
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虫子739

铁虫 (小有名气)


lwf991229(金币+1,VIP+0):鼓励新虫~ 3-14 00:59
cDNA电泳回出现条带吗?要是那样能出来了,我们不就可以不作PCR了?直接做RT就好了。
你那样电泳有结果吗?
4楼2009-03-13 18:14:54
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