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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 农杆菌转化后无法鉴定阳性克隆
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陈小信

新虫 (初入文坛)

[交流] 农杆菌转化后无法鉴定阳性克隆 已有3人参与

希望各位帮忙，我把我连接好的载体以及空载分别加5微升，利用电击转化到100微升农杆菌感受态GV3101中，在50mg /L Rif+100mg /L Car的LB培养基中生长，过了三天长出来菌落，但空载菌落长得特别多比较小，而连接好的载体菌落小且少。利用菌落PCR检测两个平板上都能扩出一致的条带，但与我要的目的条带大小不一致，我换了引物后还是同样的结果，不知道如何处理，心急

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1楼 2018-01-23 21:04:47
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zly六六

新虫 (初入文坛)
★
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那就是假阳性了呗

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陈小信
2楼2018-01-23 22:48:58
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陈小信

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by zly六六 at 2018-01-23 22:48:58
那就是假阳性了呗

那是不是就意味着没有转化成功？可是我都转化三次了每次都是这样

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3楼2018-01-24 15:43:42
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hubeigxkkk

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
载体转化农杆菌使用化学转化就可以了，电转可能要摸索条件
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陈小信
4楼2018-01-24 17:44:25
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贱贱JMe

木虫 (小有名气)

教导主任
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
电转化效率一般很高，针对常见小质粒，可以降低涂板量，有两方面好处，利于挑斑，另外抗性筛选才是有意义的。空载就能生长很多，需要查找原因。
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陈小信
想做一位科研好人
5楼2018-01-24 18:34:38
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陈小信

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by hubeigxkkk at 2018-01-24 17:44:25
载体转化农杆菌使用化学转化就可以了，电转可能要摸索条件

哦哦，那我再试试

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6楼2018-01-25 15:00:24
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陈小信

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by 贱贱JMe at 2018-01-24 18:34:38
电转化效率一般很高，针对常见小质粒，可以降低涂板量，有两方面好处，利于挑斑，另外抗性筛选才是有意义的。空载就能生长很多，需要查找原因。

好的，我再重新做试试

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7楼2018-01-25 15:02:13
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