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Vivicookie

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒保存一段时间后中间插入160bp 已有2人参与

一个确定插入片段序列正确的质粒和甘油菌分别保存半年后,再次用质粒扩增同一片段却在序列中间多160bp (原目的片段序列正确,仅中间插入,有插入序列但查不到是什么)甘油菌提质粒也是这个问题。请问这个可能是什么原因?

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Vivicookie

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小冀- at 2018-01-11 09:38:07
会引入这么多吗?插入片段还是在中间~我们也遇到过类似的问题,用高保真酶扩增的时候也是这样子,之后直接送的质粒测序,显示插入了,最后就只能重新构建了...

一直用高保真酶的,原来质粒和保存的甘油菌都是这个问题。我昨天重新克隆的序列就没问题了

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4楼2018-01-11 10:07:02
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阿门阿前1991

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那就是pcr的过程中引入的,用高保真酶试一下。
总会出现一个温柔的人,让你变得温暖,然后默默离开。
2楼2018-01-10 16:52:22
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小冀-

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 阿门阿前1991 at 2018-01-10 16:52:22
那就是pcr的过程中引入的,用高保真酶试一下。

会引入这么多吗?插入片段还是在中间~我们也遇到过类似的问题,用高保真酶扩增的时候也是这样子,之后直接送的质粒测序,显示插入了,最后就只能重新构建了
···
3楼2018-01-11 09:38:07
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小冀-

版主 (著名写手)

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引用回帖:
4楼: Originally posted by Vivicookie at 2018-01-11 10:07:02
一直用高保真酶的,原来质粒和保存的甘油菌都是这个问题。我昨天重新克隆的序列就没问题了
...

一开始我们都是在菌里保藏质粒,会出现这样的问题,现在都是把质粒提出来冻藏保存,就很少出现了
···
5楼2018-01-11 10:19:46
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