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dalian0725新虫 (小有名气)
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[求助]
杂交瘤细胞WB鉴定 已有1人参与
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求助各位大神 制备单抗时 免疫原是纯化的蛋白 筛选当中所用到的是另外一种纯化的蛋白 收集三克后的细胞上清液 用第二种蛋白进行WB检测 但是未经纯化 只是将蛋白诱导表达后提取包涵体后用尿素溶解的蛋白与杂交瘤细胞上清液进行WB鉴定 出现很多很多杂带，当然也出现了目的条带，想问一下 为什么会有这么多杂带？ 补充一下 将第二种纯化的蛋白与杂交瘤细胞上清液进行WB鉴定 是正常的 |
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dalian0725
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4楼2017-12-06 08:26:26
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
| 很正常啊，第二种蛋白不纯，里面有掉标签啊之类的情况导致蛋白分子量量不一样了啊，例如GST的重组蛋白，掉标签后，分子量就小了20多KD，蛋白跑个SDS就知道啦 |
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2楼2017-12-05 14:27:18
dalian0725
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3楼2017-12-06 08:25:18
【答案】应助回帖
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那你把蛋白跑个SDS看一下，也许是切了标签，但是切的可能不是100%切掉呢？或者有的酶切的时候导致蛋白也别水解成不同分子量的呢？是吧，这种重组蛋白一般都很难是单一条带的，，需要一点点调整抗体及蛋白浓度，才会把杂带或者你不想要的带给优化的 |
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5楼2017-12-06 10:45:27