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GC-MS测定水稻叶片代谢物的前处理
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各位虫友，大家好 本人目前在提取测定水稻叶片的氨基酸、糖类等代谢物，是新手。经过查文献后，提取方法为提取液（甲醇：氯仿：去离子水 = 2.5：1：1）70℃水浴15min，用GC-MS检测不到东西或者只能检测到吡啶。现在将具体步骤列下来，请问是否哪些步骤有问题或有细节没有注意到。我自己在提取过程中遇到的疑惑附在最后，求解答，谢谢！ 提取步骤： 1 将植物鲜样用液氮研磨成粉末，称取0.1g粉末于2ml离心管中。 2 向离心管中加入1.5ml提取液（甲醇：氯仿：去离子水 = 2.5：1：1）。 3 向离心管中加入50μL的核糖醇（0.2g/L），按上盖子。 4 离心管涡旋10s。 5 离心管在70℃水浴15min。 6 离心管在4℃下，12000g离心10min。 7 取200μL的上清液于液谱瓶中，氮吹干。 8 向液谱瓶中加入80μL的甲氧胺盐酸盐（20mg/ml，溶于吡啶），37℃恒温箱孵育2h。 9 向液谱瓶中加入50μL的MSTFA，37℃恒温箱孵育2h。 10 向液谱瓶中加入870μL的甲醇溶液，使得溶液体积达到1ml，气相质谱待测。 问题 1 70℃水浴时离心管是否盖盖子，如果盖盖子的话水浴时会崩开，不盖的话溶液会挥发。 2 在经过甲氧胺盐酸盐和MSTFA孵育后，液谱瓶中溶液只有130微升，是否需要加入甲醇使得溶液体积高一点（加甲醇这一步是小老师建议的，在文献中没有看到过）？ |
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3楼2017-10-27 17:35:33
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吉利画眉(晋鹏代发): 金币+5, 鼓励回帖交流~欢迎常来农林版交流经验~ 2017-10-28 11:31:48
吉利画眉(晋鹏代发): 金币+5, 鼓励回帖交流~欢迎常来农林版交流经验~ 2017-10-28 11:31:48
我们提取苹果叶片挥发性物质是避免高温的，我们是用超声萃取，20摄氏度，半个小时。还有你的那一步氮气吹干是不是也是挥发性物质减少的原因之一。我也是刚刚开始做，说错了不要介意哦。 发自小木虫Android客户端 |
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吉利画眉2楼2017-10-27 17:32:09
4楼2017-10-27 17:54:44
5楼2017-10-27 21:57:56