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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂
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sysg07124

新虫 (初入文坛)

[求助] 抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂 已有1人参与

现在做一个需要将抗体和核酸共价连接的实验，sulfo-SMCC做交联剂，开始用SMCC先活化抗体（室温2小时），然后用DTT还原巯基DNA（37℃ 1小时），分别过脱盐柱后混合透析，得到的产物跑SDS-PAGE，考蓝染色，在泳道的最顶端出现了条带（与marker相比分子量超过了250 kDa）。经验证，SMCC只与抗体混合，室温静置半小时就可以在泳道上端产生明显的条带，应该是抗体之间发生了交联。
然后又考虑用氨基的探针先与SMCC室温震荡孵育3小时，然后再与抗体孵育过夜，SDS-PAGE，考蓝染色，条带与纯抗体的对照完全没有差别。问题到底出在哪里，谁有具体的实验步骤可供参考？

抗体与核酸共价连接，sulfo-SMCC做交联剂
附件1.jpg@biostar2009
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1楼 2017-10-02 20:04:44
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葭莩2022

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

想问一下这个实验的具体步骤，还有什么方法验证抗体和核酸偶联。我用核酸电泳验证，没有偶联成功，请教一下实验步骤
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11楼2022-09-15 10:32:54
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眼睛儿

新虫 (小有名气)
你这个电泳跑的漂亮

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2楼2017-10-02 20:19:54
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petty04

新虫 (职业作家)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-10-02 23:25:52
产生抗体与抗体的偶联应该是不可避免的，可能你需要计算好蛋白和核酸的摩尔比，用摩尔比远过量的巯基核酸做反应试试看，应该会一定程度上降低蛋白之间的偶联。另外，反应时尽量把蛋白调到较低浓度，降低蛋白互相之间碰撞偶联的几率

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sysg07124
3楼2017-10-02 20:32:51
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minecat

木虫 (初入文坛)
全程在缓冲液中加入螯合剂EDTA试试。

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4楼2017-10-02 20:42:32
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