| 查看: 12245 | 回复: 8 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
鼠尾基因型鉴定，总P不出目的条带。
|
||
|
我们定了一批KO小鼠，做基因型鉴定。总使用含有SDS的lysis buffer 以及家蛋白酶K 裂解鼠尾，然后用乙醇沉淀基因组DNA。基因组我跑了电泳，有蛋白残留，在孔里，但是基因组DNA确实有条带。 后面进行PCR，有一个目的条带3.9k.始终p.不出来，其他两个条带1K和0.5k都可以。 改变了条件，使用高保真都没出现过。 而且奇怪的是的，在WT本不该有1K，但是，有了。 现在人没在实验室，我过一会发个图。 求大神解释原因可能在哪？ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有287人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有6人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
8楼2017-09-12 20:50:21
不吃M的鱼
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2134.6
- 红花: 1
- 帖子: 78
- 在线: 17.4小时
- 虫号: 1646205
- 注册: 2012-02-27
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2017-09-09 08:38:53
|
确实不好p，但是，公司那边做出来没问题，我们就是重复不出来。给另一个老师做的鉴定，他们的很短，很好p，所以应该排除操作原因。条件也换过很多。延伸到5分钟都没有，高保真也没有。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-09-09 08:45:14
不吃M的鱼
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2134.6
- 红花: 1
- 帖子: 78
- 在线: 17.4小时
- 虫号: 1646205
- 注册: 2012-02-27
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-09 19:26:47
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-09 19:26:47
|
长的确实不好P，可能酶不一样，也有可能模板提的质量不怎么好，原因很多。建议你设计一对短的引物试试。你们敲除的前段应该不长吧，为什么要用这么长的引物坚定呢？ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-09-09 08:47:48
