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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 鼠尾基因型鉴定，总P不出目的条带。
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sevenwish

新虫 (小有名气)

[求助] 鼠尾基因型鉴定，总P不出目的条带。

我们定了一批KO小鼠，做基因型鉴定。总使用含有SDS的lysis buffer 以及家蛋白酶K 裂解鼠尾，然后用乙醇沉淀基因组DNA。基因组我跑了电泳，有蛋白残留，在孔里，但是基因组DNA确实有条带。     后面进行PCR，有一个目的条带3.9k.始终p.不出来，其他两个条带1K和0.5k都可以。   改变了条件，使用高保真都没出现过。  而且奇怪的是的，在WT本不该有1K，但是，有了。   现在人没在实验室，我过一会发个图。  求大神解释原因可能在哪？

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1楼 2017-09-09 07:17:06
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不吃M的鱼

金虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-09 19:26:47
长的确实不好P，可能酶不一样，也有可能模板提的质量不怎么好，原因很多。建议你设计一对短的引物试试。你们敲除的前段应该不长吧，为什么要用这么长的引物坚定呢？

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4楼2017-09-09 08:47:48
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不吃M的鱼

金虫 (小有名气)
3.9k是不是有点长了不好扩增？我做鱼的，长的有时候不太好扩

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2楼2017-09-09 08:38:53
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sevenwish

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不吃M的鱼 at 2017-09-09 08:38:53
3.9k是不是有点长了不好扩增？我做鱼的，长的有时候不太好扩

确实不好p，但是，公司那边做出来没问题，我们就是重复不出来。给另一个老师做的鉴定，他们的很短，很好p，所以应该排除操作原因。条件也换过很多。延伸到5分钟都没有，高保真也没有。

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3楼2017-09-09 08:45:14
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bsese

至尊木虫 (文坛精英)
祝好！！

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山顶拟诗　歌得吧贺
5楼2017-09-09 08:50:41
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