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定点突变，电泳总是没有产物
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新手刚开始做定点突变，要做两个突变体，每个突变体包含两个点突变。由于突变点靠的近，设计的引物同时包含了两个突变位点，两对互补的引物长度分别为35，46bp，Tm在75度左右。 刚开始用prime star怎么都p不出来，后来换了KOD HOT START，用35bp的引物做了个剃度pcr，63-72度，结果63°有较量亮的条带，71°也有一天很暗的条带。后来扩大体系，同时用46bp的引物进行剃度pcr，60-75°，为了对比，我加了一个原始的重组质粒做对比，结果梯度pcr没有条带，35bp引物进行的突变倒是有条带，但和原始质粒位置不一致，跑得快了一些。 问老师，他让我按说明书来，同时退火温度用68°，因为他以前也用这个酶做过定点突变，就用的68°，结果都没有p出来。 很难受，这个KOD酶还比较贵，再这样下去都快被我造光了。 Pcr条件：95° 2min，95° 20s，68° 10s，70° 4min 发自小木虫IOS客户端 |
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21_gram7楼
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1802190075711楼
2017-09-04 23:59
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star1991112812楼
2017-09-05 00:25
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18021900757(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫IOS客户端
plantabiotic14楼
2017-09-05 00:30
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