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曼陀罗爱上黑夜

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序问题 已有5人参与

设计引物做pcr,产物电泳后条带很亮,可是为什么测序总是测不出来,测序结果总是失败?

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草溪河

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by yufeiwaner at 2017-08-30 11:17:19
把峰图传上来看看。
楼主测序是什么目的?
通常直接送PCR产物是很靠谱的,除非你的目标产物和非特异扩增产物大小一致,混杂了。
峰很杂很乱,那就得重新设计引物。
还有,如果你是鉴定菌种,则最好别连载体测序 ...

同意该说法,并不是所有pcr产物测序都需要连载体,根据你的目的需要来确定。pcr产物测序很容易的,我们送的公司只要电泳能看见条带,基本上就能测出来,对浓度要求并不高,可能因公司而异吧。若pcr产物有非特异片段,那测序出来肯定是乱峰,这时建议连载体测序。有时复杂片段(比如高GC,富含poly结构等等)都会影响测序结果,建议测序时注明该特征。

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18楼2017-09-11 15:31:52
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bbass533

禁虫 (小有名气)


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-28 06:34:23
本帖内容被屏蔽

2楼2017-08-24 15:25:36
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luoyl210

新虫 (著名写手)

3楼2017-08-24 15:37:27
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曼陀罗爱上黑夜

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bbass533 at 2017-08-24 15:25:36
不建议送pcr产物去测序,最好是连接载体再测。不然会出现很多你想不出来的问题

原来是这样啊!可是连载体不会很麻烦吗?什么防止载体自连还有粘性末端什么的

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4楼2017-08-24 15:58:48
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