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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白加了loading buffer，没煮，放-20℃会有什么影响吗？
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gengxin60
11楼2017-08-22 20:36:39
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snoopytbw

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显然是没影响的，Loading buffer的作用是啥，就是变性蛋白。煮蛋白的作用呢？也是变性蛋白，区别是loading 的更加温和，某些蛋白可能用loading变性后亚基不容易分离。你加了loading 其实一周内都可以直接放4度的，记住，避免反复冻融！！！-20和-80其实都不好！！！尤其-80，冻融1两次蛋白都挂了。
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一个人的格调
12楼2017-08-23 08:53:43
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snoopytbw

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补充下，loading的优势还有一点，极大的抑制蛋白酶的效率，几乎可以说放在loading里面短期内储存的蛋白，几乎不会被蛋白酶降解。但是loading后的蛋白有个问题，时间长了，容易结晶，沉降，然后重新溶解后发现，很难溶解了。其实原因就是变性蛋白的性质发生了显著改变
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13楼2017-08-23 08:57:02
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一个人的格调

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-23 08:53:43
显然是没影响的，Loading buffer的作用是啥，就是变性蛋白。煮蛋白的作用呢？也是变性蛋白，区别是loading 的更加温和，某些蛋白可能用loading变性后亚基不容易分离。你加了loading 其实一周内都可以直接放4度的，记 ...

谢谢，很受益

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14楼2017-08-23 12:33:32
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一个人的格调

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-23 08:57:02
补充下，loading的优势还有一点，极大的抑制蛋白酶的效率，几乎可以说放在loading里面短期内储存的蛋白，几乎不会被蛋白酶降解。但是loading后的蛋白有个问题，时间长了，容易结晶，沉降，然后重新溶解后发现，很难 ...

那你的意思是那种把蛋白加了Loading煮后放在-80的方法其实是不可取的吗？

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15楼2017-08-23 12:35:13
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一个人的格调

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-23 08:57:02
补充下，loading的优势还有一点，极大的抑制蛋白酶的效率，几乎可以说放在loading里面短期内储存的蛋白，几乎不会被蛋白酶降解。但是loading后的蛋白有个问题，时间长了，容易结晶，沉降，然后重新溶解后发现，很难 ...

再追问一下，你觉得我那些蛋白还可以重新测浓度吗？

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16楼2017-08-23 21:54:07
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snoopytbw

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引用回帖:
15楼: Originally posted by 一个人的格调 at 2017-08-23 12:35:13
那你的意思是那种把蛋白加了Loading煮后放在-80的方法其实是不可取的吗？
...

加loading，不建议长期保存。要冻，分装后，加抑制剂，放-80吧。PMSF也可以
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17楼2017-08-24 08:34:28
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 一个人的格调 at 2017-08-23 21:54:07
再追问一下，你觉得我那些蛋白还可以重新测浓度吗？
...

如果加了loading，好像测不了吧，反正用BF不行，BCA，我觉得也不行吧，那么黏
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18楼2017-08-24 08:35:04
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七七的祺祺

铁虫 (初入文坛)
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只是用作wb，应该问题不大吧，早晚都得加。不过完全没影响应该也不可能。

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19楼2017-08-24 12:25:09
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一个人的格调

铜虫 (初入文坛)
内容已删除
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20楼2017-08-25 08:27:30
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