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11楼2017-08-22 20:36:39
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snoopytbw

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显然是没影响的,Loading buffer的作用是啥,就是变性蛋白。煮蛋白的作用呢?也是变性蛋白,区别是loading 的更加温和,某些蛋白可能用loading变性后亚基不容易分离。你加了loading 其实一周内都可以直接放4度的,记住,避免反复冻融!!!-20和-80其实都不好!!!尤其-80,冻融1两次蛋白都挂了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

12楼2017-08-23 08:53:43
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snoopytbw

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补充下,loading的优势还有一点,极大的抑制蛋白酶的效率,几乎可以说放在loading里面短期内储存的蛋白,几乎不会被蛋白酶降解。但是loading后的蛋白有个问题,时间长了,容易结晶,沉降,然后重新溶解后发现,很难溶解了。其实原因就是变性蛋白的性质发生了显著改变
13楼2017-08-23 08:57:02
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一个人的格调

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-23 08:53:43
显然是没影响的,Loading buffer的作用是啥,就是变性蛋白。煮蛋白的作用呢?也是变性蛋白,区别是loading 的更加温和,某些蛋白可能用loading变性后亚基不容易分离。你加了loading 其实一周内都可以直接放4度的,记 ...

谢谢,很受益

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14楼2017-08-23 12:33:32
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一个人的格调

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-23 08:57:02
补充下,loading的优势还有一点,极大的抑制蛋白酶的效率,几乎可以说放在loading里面短期内储存的蛋白,几乎不会被蛋白酶降解。但是loading后的蛋白有个问题,时间长了,容易结晶,沉降,然后重新溶解后发现,很难 ...

那你的意思是那种把蛋白加了Loading煮后放在-80的方法其实是不可取的吗?

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15楼2017-08-23 12:35:13
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一个人的格调

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-23 08:57:02
补充下,loading的优势还有一点,极大的抑制蛋白酶的效率,几乎可以说放在loading里面短期内储存的蛋白,几乎不会被蛋白酶降解。但是loading后的蛋白有个问题,时间长了,容易结晶,沉降,然后重新溶解后发现,很难 ...

再追问一下,你觉得我那些蛋白还可以重新测浓度吗?

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16楼2017-08-23 21:54:07
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)


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引用回帖:
15楼: Originally posted by 一个人的格调 at 2017-08-23 12:35:13
那你的意思是那种把蛋白加了Loading煮后放在-80的方法其实是不可取的吗?
...

加loading,不建议长期保存。要冻,分装后,加抑制剂,放-80吧。PMSF也可以
17楼2017-08-24 08:34:28
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 一个人的格调 at 2017-08-23 21:54:07
再追问一下,你觉得我那些蛋白还可以重新测浓度吗?
...

如果加了loading,好像测不了吧,反正用BF不行,BCA,我觉得也不行吧,那么黏
18楼2017-08-24 08:35:04
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七七的祺祺

铁虫 (初入文坛)


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只是用作wb,应该问题不大吧,早晚都得加。不过完全没影响应该也不可能。

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19楼2017-08-24 12:25:09
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一个人的格调

铜虫 (初入文坛)

内容已删除
20楼2017-08-25 08:27:30
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