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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » cDNA扩内参基因出现三条带，求大神解释一下
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芯随风静

新虫 (初入文坛)

[交流] cDNA扩内参基因出现三条带，求大神解释一下

RNA提取是用CTAB法提取的，反转录过程用的是takara的试剂盒，去DNA是42℃，2min。反转录是37℃，15min，85℃，5s。

cDNA扩内参基因出现三条带，求大神解释一下


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1楼 2017-08-18 18:15:13
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18253592055

金虫 (正式写手)
★
芯随风静(金币+1): 谢谢参与
可以试着降低mg2+浓度，因为mg2+浓度过高将会导致酶活性变高，杂带变多，退火温度设个梯度，找一个合适退火温度。

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8楼2017-08-19 12:09:43
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残笙

木虫 (正式写手)
★
芯随风静(金币+1): 谢谢参与
看三条带中有没有你的目的条带，有的话就提高退火温度试试

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5楼2017-08-18 23:59:57
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芯随风静

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 残笙 at 2017-08-18 23:59:57
看三条带中有没有你的目的条带，有的话就提高退火温度试试

有目的条带，退火温度已经58℃了，要不要按引物上给的退火温度PCR，好像才52℃。

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6楼2017-08-19 09:12:34
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残笙

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 芯随风静 at 2017-08-19 09:12:34
有目的条带，退火温度已经58℃了，要不要按引物上给的退火温度PCR，好像才52℃。
...

可以做个退火温度梯度pcr，公司合成引物都是供参考的，如果剃度pcr跑不出来的话就可能是引物的问题了

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7楼2017-08-19 10:11:22
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xhmaohan2楼
2017-08-18 19:09   回复  
芯随风静(金币+1): 谢谢参与
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xqyqwy3楼
2017-08-18 19:28   回复  
芯随风静(金币+1): 谢谢参与
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