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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pCR
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fengduyanyu

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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10楼: Originally posted by 2017mwl at 2017-08-17 12:37:21
我也没提质粒 就做了菌落PCR 能跑出来 菌液pcr跑不出来
...

～反正我尝试过多次，有时候可以，有时候不可以。

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11楼2017-08-17 12:38:35
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jerry110

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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8楼: Originally posted by 2017mwl at 2017-08-17 11:38:24
菌液PCR扩不出来 菌落能扩出来的原因有哪些呢？假阳性概率高点吧
...

我们通常是构建质粒，转化大肠杆菌，菌落菌液都可以扩出来，但是有些菌如果是革兰氏阳性菌菌落可以扩出来，但是菌液需要处理一下，比如煮一下，冻融一下，仅供参考，祝好！
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12楼2017-08-17 14:46:23
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2017mwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by jerry110 at 2017-08-17 14:46:23
我们通常是构建质粒，转化大肠杆菌，菌落菌液都可以扩出来，但是有些菌如果是革兰氏阳性菌菌落可以扩出来，但是菌液需要处理一下，比如煮一下，冻融一下，仅供参考，祝好！...

我用的是大肠杆菌 菌落能扩出来 菌液扩不出来 pcr变性温度98度 足以使菌裂解了

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13楼2017-08-17 18:51:10
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jerry110

新虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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13楼: Originally posted by 2017mwl at 2017-08-17 18:51:10
我用的是大肠杆菌 菌落能扩出来 菌液扩不出来 pcr变性温度98度 足以使菌裂解了
...

有见过做大肠杆菌敲除的，菌液验证扩不出来，他们会选择处理下菌液会好一些
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14楼2017-08-18 09:24:29
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hdprca806
15楼2017-08-18 09:28:14
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mdfpddp152
16楼2017-08-18 09:33:31
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
很正常，菌液离心，洗涤几遍在做就好了

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17楼2017-08-18 09:41:41
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
菌液培养基含大量的有机酸，会结合镁离子，抑制PCR反应

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18楼2017-08-18 09:42:30
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nhyqdsm10
19楼2017-08-18 09:47:24
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江灵敏

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我还出现一个更奇怪的事，菌落pcr 有目的基因，提出质粒pcr 就没有，送去测序又正确

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20楼2017-08-18 09:49:33
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