菌落pCR - 分子生物 - PCR相关 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

11楼2017-08-17 12:38:35

jerry110

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8楼: Originally posted by 2017mwl at 2017-08-17 11:38:24
菌液PCR扩不出来菌落能扩出来的原因有哪些呢？假阳性概率高点吧
...

我们通常是构建质粒，转化大肠杆菌，菌落菌液都可以扩出来，但是有些菌如果是革兰氏阳性菌菌落可以扩出来，但是菌液需要处理一下，比如煮一下，冻融一下，仅供参考，祝好！

12楼2017-08-17 14:46:23

2017mwl

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12楼: Originally posted by jerry110 at 2017-08-17 14:46:23
我们通常是构建质粒，转化大肠杆菌，菌落菌液都可以扩出来，但是有些菌如果是革兰氏阳性菌菌落可以扩出来，但是菌液需要处理一下，比如煮一下，冻融一下，仅供参考，祝好！...

我用的是大肠杆菌菌落能扩出来菌液扩不出来 pcr变性温度98度足以使菌裂解了

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13楼2017-08-17 18:51:10

jerry110

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13楼: Originally posted by 2017mwl at 2017-08-17 18:51:10
我用的是大肠杆菌菌落能扩出来菌液扩不出来 pcr变性温度98度足以使菌裂解了
...

有见过做大肠杆菌敲除的，菌液验证扩不出来，他们会选择处理下菌液会好一些

14楼2017-08-18 09:24:29

hdprca806

15楼2017-08-18 09:28:14

mdfpddp152

16楼2017-08-18 09:33:31

snoopytbw

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很正常，菌液离心，洗涤几遍在做就好了

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17楼2017-08-18 09:41:41

snoopytbw

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菌液培养基含大量的有机酸，会结合镁离子，抑制PCR反应

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18楼2017-08-18 09:42:30

nhyqdsm10

19楼2017-08-18 09:47:24

江灵敏

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我还出现一个更奇怪的事，菌落pcr 有目的基因，提出质粒pcr 就没有，送去测序又正确

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20楼2017-08-18 09:49:33