| 查看: 10072 | 回复: 6 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
荧光定量PCR加入的模板量应该是多少 已有1人参与
|
|||
|
想请教一下各位大神做荧光定量PCR反应实验时，按照说明书，反应体系是20微升，加入的模板量应该是多少合适呢？用内参基因actin还有其他的几个基因做了一下实验，actin基因的CT值在21左右，其他的几个基因的CT值也在20-25附近？ 是根据CT值大小来决定模板用量吧？ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有286人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（一）
已经有20人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
晋鹏
版主 (知名作家)
- MolEPI: 6
- 应助: 626 (博士)
- 贵宾: 0.096
- 金币: 27592.6
- 散金: 1052
- 红花: 288
- 沙发: 2
- 帖子: 5663
- 在线: 726.4小时
- 虫号: 1183978
- 注册: 2011-01-05
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
- 管辖: 农林
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
假如模板分子有一个，那么经过一轮PCR，就变成2个，这两个经过又一轮PCR，变成了4个，依次……，发现经过40轮，变成了2的40次方个，伴随着每轮PCR有荧光探针的水解，根据荧光情况判断原始产量，推算初始模板量。 我们实验室一般是用500-1000ngRNA做RT，然后得到20μlcDNA，加入85μl H2O，等于总体积是105μl, 每次做qPCR的时候总体积是25μl: 12.5μl SYBR Green Taq 2x +6.5μl H2O + 0.5μl primer1 10μM +0.5μl primer2 10μM + 5μl cDNA 反正这个条件下我们的qPCR都能做出来，你可以做个参考 |
3楼2017-08-11 21:14:52
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2017-08-11 20:28:13
|
好羡慕你们都说我们实验室啊，呜呜呜，研究生还没入学，被老师逼着做实验，实验室之前只有一个博士师姐做分子方向，然而她已经毕业了。我还想问一下每个重复孔的CT值的标准偏差多少合适呢 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-08-11 23:08:11
5楼2017-08-11 23:08:55