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反向PCR 测序失败 已有2人参与
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经历了几个月的摸索，终于能够扩增出来条带了，可是现在卡在了测序这一步，说是杂带太多。 本人按照一般的反向PCR操作，先使用 EcoR I 和 Hind III 来双酶切基因组，回收之后 T4 连接酶连接，再次回收，使用Takara公司的PrimeSTAR GXL酶来进行反向PCR扩增，结果扩得条带，之前使用PMD18-T载体一直没有连接上，所以直接送PCR回收产物去测序，可是一直是杂带太多，无法测序。各位大牛有没有什么好的建议给小弟。附一张PCR图  IMG_20170730_180705.jpg |
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