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请，你微笑

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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我做重叠延伸PCR连接大片段的时候总是不出目的条带，并且会出一些固定的杂带，但都不是小片段的大小。期间调整过温度，模板浓度，引物浓度都没起作用，求各位大神帮忙！！！下图为PCR结果，上图的目的片段为2500，下图的目的条带为3092。

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1楼 2017-07-30 18:17:50

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

as1688816

木虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
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帖子: 821
在线: 205.7小时
虫号: 1213860

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-01 07:45:46

引用回帖:

8楼: Originally posted by 请，你微笑 at 2017-07-31 14:41:35
比如我有四个片段1，2，3，4。先用重叠延伸把1和2连起来（用1-2表示）；3和4连起来（用3-4表示）。然后再将1-2和3-4作为模板，先不加引物让它搭桥P 15个循环，再加引物P 30个循环，最后想得到一个1-2-3-4连接起来的 ...

没必要单独搭桥，直接将前两种产物作为模板混合加正常两端引物扩就行了。

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