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在构建RNA干扰载体中,目的片段与PLKO.1的连接问题 已有1人参与
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新人求教 1、在合成我的干扰片段后(上海生工合成),发现目的片段的5`端是没有磷酸化的,而是羟基。因为在DNA连接时要形成3`-5`磷酸二酯键,这样目的片段和我的载体不是没有办法连接了?看了所有教程,都没有谈到5`端需要磷酸化,是不是默认合成的5端都没有磷酸化? 2、关于1的问题,我想到在单酶切载体,为了防止自身环化而用碱性磷酸酶把载体的5`端磷酸集团转为羟基,那目的片段再连接的时候是怎么连上的? |
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9楼2017-07-28 16:14:49
wangranjun
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2楼2017-07-27 14:18:14
3楼2017-07-28 09:25:41
wangranjun
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4楼2017-07-28 10:20:00












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