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求助！用高保真酶PCR，无条带却胶孔亮是怎么回事？急！ 已有3人参与
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用的拟南芥cDNA做的PCR，目标条带2400bp，之前是用Taq酶可以p出来，做的退火温度梯度，发现56度最合适（图1第二泳道），之后就用高保真pfu做，50ul体系:模板1ul，上下引物各1ul，pfu酶 1ul，buffer 10ul，dNTP 4ul，ddH2O 32ul. 程序按全式金pfu说明书来的:95°5:00，95°20s，56°20s，72°1:30，37个循环，72°5:00。琼脂糖胶配的是1.2％，也换了新电泳液，然而还是跑不出来（图二）maker都是5000bp……重复好多次都是这样。请问有没有可能是模板浓度太高了？需要稀释多少倍？还是引物有问题？挺急的，谢谢各位大神啦！  发自小木虫Android客户端 |
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高保真聚合酶相比于普通聚合酶对模板温度等条件要严格，条件要多摸索一下。也可以使用全式金的那种混合酶TA克隆，再链接一个TA载体用于测序以及目的片段的获得 发自小木虫Android客户端 |
10楼2017-07-24 01:15:10
zhouxfd
木虫 (正式写手)
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2楼2017-07-20 08:33:17
bbqlhb
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- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2017-07-20 08:40:18
4楼2017-07-20 10:22:30
50