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younglinlin

禁虫 (小有名气)
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1楼2017-07-15 19:20:07
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18829282158

新虫 (初入文坛)
可以尝试加一下DMSO

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7楼2017-08-06 12:03:57
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梦幻在玩

铜虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-15 23:29:24
那是引物二聚体和非特异带之类的东西吧。。。如果是我的话就把退火温度调高一点或者换一个引物，cg太高并且扎堆啦。。。

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2楼2017-07-15 19:45:15
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younglinlin

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2017-07-16 16:10:19
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梦幻在玩

铜虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-08-06 12:10:24
引用回帖:
3楼: Originally posted by younglinlin at 2017-07-16 16:10:19
我也想是非特异性条带，可是不理解为嘛延伸时间是三分半，还会出现这种大小条带。啥叫cg值太高扎堆了呢？...

引物gc含量一般40—50％左右比较好，引物21碱基就是cg加起来八个或者九个是最好的。同时cg最好还能分散开，因为这俩的配对不是比at多个氢键么，更加稳定。多个cg连续的话退火的时候引物二聚体不愿意分开，cg聚集的地方尤其不愿意分开，不结合模板。
引物实在不能换的话就只能提高退火温度，当然我没听说过60度以上退火的。。。

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4楼2017-07-16 21:58:25
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