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皮皮璐

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR后核酸电泳没有条带 已有2人参与

我是7月12号提的细菌基因组，7月14号跑的PCR ，但是为什么跑不出条带？之前提的基因组是可以的，所以我想富集一下割胶送去测序，可是跑了两次都没出现条带，各位大神指点。

PCR后核酸电泳没有条带


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1楼 2017-07-15 15:49:32
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-07-15 23:29:46
1、是否已经P出来了呢？

2、如果没有。可能有如下原因:  
1.模板:含有抑制物，含量低  2.Buffer对样品不合适  
3.引物设计不当或者发生降解  
4.反应条件：退火温度太高，延伸时间太短  

对策:  
1.纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量  2.更换Buffer或调整浓度  
3.重新设计引物（避免链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物  4.降低退火温度、延长延伸时间
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及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-07-15 15:57:30
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皮皮璐

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-15 15:57:30
1、是否已经P出来了呢？

2、如果没有。可能有如下原因:  
1.模板:含有抑制物，含量低  2.Buffer对样品不合适  
3.引物设计不当或者发生降解  
4.反应条件：退火温度 ...

嗯嗯，谢谢，真棒

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3楼2017-07-15 16:13:21
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双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)
感觉没P出来，是不是扩增程序有问题呢？

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4楼2017-07-15 19:02:31
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921293056

银虫 (初入文坛)
我也遇到了这种情况

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5楼2017-07-16 15:30:36
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皮皮璐

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 双鱼座的瓶盖 at 2017-07-15 19:02:31
感觉没P出来，是不是扩增程序有问题呢？

之前是p出来过呢，同样的程序

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6楼2017-07-17 16:21:10
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皮皮璐

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 921293056 at 2017-07-16 15:30:36
我也遇到了这种情况

再做一遍平行了只能

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7楼2017-07-17 16:21:35
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921293056

银虫 (初入文坛)
我也遇到过这种情况，跑出来完全没有条带，然后我把退火温度降一些，然后就有一些条带了

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8楼2017-07-17 21:23:05
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皮皮璐

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 921293056 at 2017-07-17 21:23:05
我也遇到过这种情况，跑出来完全没有条带，然后我把退火温度降一些，然后就有一些条带了

嗯嗯，我试一下

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9楼2017-07-18 14:36:19
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PattyGao

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有时候确实是会出现之前能扩出来，后来又扩不出来的情况，乍一看，引物设计的不是太好，建议做一个梯度分析一下最适的条件
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10楼2017-07-18 15:22:53
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