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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因GC含量高，引物能否设在起始密码子前50bp？做原核表达用
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bq28

新虫 (初入文坛)

[交流] 基因GC含量高，引物能否设在起始密码子前50bp？做原核表达用 已有5人参与

基因的CDS区GC含量达70%，如果从起始密码子处设计引物会包含一段连续的GC，能否在ATG前50bp处设计引物扩增片段克隆到原核表达载体上，表达HIs蛋白用。
望大神指导

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1楼 2017-07-13 21:22:48
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fengshen2005

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以分两步，第一步将UTR+CDS一起扩增，然后以此为模板、以CDS

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3楼2017-07-14 06:30:39
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fengshen2005

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
以CDS两端引物再扩增

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4楼2017-07-14 06:32:47
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
★
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5楼: Originally posted by bq28 at 2017-07-14 07:32:34
是用KOD plus扩增的，之前扩不出来 还加了GC buffer
...

加了betaine 和 DMSO没？
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7楼2017-07-14 07:43:01
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
可以用KOD扩
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2楼2017-07-14 06:03:20
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bq28

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-14 06:03:20
可以用KOD扩

是用KOD plus扩增的，之前扩不出来 还加了GC buffer

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5楼2017-07-14 07:32:34
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bq28

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fengshen2005 at 2017-07-14 06:30:39
可以分两步，第一步将UTR+CDS一起扩增，然后以此为模板、以CDS

好的，试一下

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6楼2017-07-14 07:32:59
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jerry110

新虫 (小有名气)
体系加DMSO
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8楼2017-07-14 09:23:44
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bq28

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-14 07:43:01
加了betaine 和 DMSO没？...

betaine未加，GC buffer 中有DMSO吧，所以未另外添加。
请问加betaine的作用是什么呢？

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9楼2017-07-14 13:30:22
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小小银河

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
新手上路，来学习下

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10楼2017-07-14 21:17:20
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