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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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qiaoqiao1223

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 求助:定量PCR结果无CT值

昨天跑了一次定量,想做标准曲线,但是出来的结果没有CT值。反应模板是线粒体DNA,引物、反应条件等都是经其他实验室测定、摸索过的。
我们把标准样品梯度稀释,只有浓度最高的样品有CT值,30多。
同时一起跑的几个待测样品,也有的有CT值(30多),有的没有。

这种情况是不是说明我们标准样品的浓度太低了?
下一步调整是需要增加样品浓度?还是增加循环次数时间?还是两个都要? 或者是因为别的问题?
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qiaoqiao1223

专家顾问

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引用回帖:
2楼: Originally posted by stabilized at 2017-07-04 08:46:14
最好先用PCR试试条件,跑电泳确认能P出条带

我们打算换个标准样品,增加以下循环次数再试一下~等结果出来了,如果还没有CT值,就再麻烦大家帮忙分析一下~
8楼2017-07-05 07:29:42
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stabilized

实习版主

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-05 07:42:42
最好先用PCR试试条件,跑电泳确认能P出条带
坚持!
2楼2017-07-04 08:46:14
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yucuiyuan00

超级版主

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-05 07:42:28
一般荧光定量PCR Ct值30多,说明模板浓度比较低,需要提高模板浓度。PCR结束有扩增曲线的话再跑胶确认下片段大小。循环数可以增加到40。
保持平常心❤
3楼2017-07-04 09:03:08
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fano8o9sin

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是模板浓度太低了,一般循环次数设置到40
4楼2017-07-04 10:12:44
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