应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助！基因克隆不出来，要疯了
51/1返回列表
查看: 4863  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

眉间芳华

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助！基因克隆不出来，要疯了 已有13人参与

各位大神好，本人菜鸟一枚，最近在克隆基因。基因长1770bp，已经p出了1700多了，但是atg后面的36bp一直出不来，尝试了pfu、taq、extaq、longamp酶。在启动子和基因内部设计引物，p了500bp，发现atg那段的引物设计的也没问题，但就是p不出来全长?~~~已经做了三个多月了，最近总挨老板骂~~·希望有经验的高手们给点建议。小女子不甚感谢~

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-07-03 14:40:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-04 23:00:58
建议做个BLAST分析看看，大多数公布的序列是否含有那36bp，如果多数的没有的，说明是样本或其他的问题，如果不同来源的序列都是有的，就可能是你们实验的问题。如果纯粹的测序两头测不出来，建议克隆后用距离克隆位点远一点的测序引物来测或测双向。
赞一下 回复此楼
为什么
8楼2017-07-04 18:05:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

collins_1

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么是只有一个小段没有p出来呢？
赞一下(1人) 回复此楼
坚持不懈
2楼2017-07-03 15:06:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不日骑士殿

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
测序结果没显示那一段吗？如果后引物没问题，正常来说顺序扩增应该是可以扩出来的呀。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-07-03 16:46:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

六维空想

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你直接在引物上加那些碱基再p一次不就可以了

发自小木虫Android客户端
赞一下(3人) 回复此楼
4楼2017-07-03 18:51:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +24 医学老男孩 2026-08-13 50/2500 2026-08-15 06:38 by 学员8dgXkO
[基金申请] filecode +7 cratir 2026-08-14 11/550 2026-08-15 06:19 by 学员8dgXkO
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:08 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭