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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助！基因克隆不出来，要疯了
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眉间芳华

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助！基因克隆不出来，要疯了 已有13人参与

各位大神好，本人菜鸟一枚，最近在克隆基因。基因长1770bp，已经p出了1700多了，但是atg后面的36bp一直出不来，尝试了pfu、taq、extaq、longamp酶。在启动子和基因内部设计引物，p了500bp，发现atg那段的引物设计的也没问题，但就是p不出来全长?~~~已经做了三个多月了，最近总挨老板骂~~·希望有经验的高手们给点建议。小女子不甚感谢~

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1楼 2017-07-03 14:40:41
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贱贱JMe

木虫 (小有名气)

教导主任
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-04 23:00:46
如果情况像你说的一样的，那么更换酶意义不大。扩增出来的结果有缺失，问题要么在引物要么在模板。如果是中间部分有缺失，那就要重新梳理实验设计了，P丢可能性很小吧。
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想做一位科研好人
7楼2017-07-04 17:00:53
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collins_1

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么是只有一个小段没有p出来呢？
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坚持不懈
2楼2017-07-03 15:06:01
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不日骑士殿

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
测序结果没显示那一段吗？如果后引物没问题，正常来说顺序扩增应该是可以扩出来的呀。
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3楼2017-07-03 16:46:24
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六维空想

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你直接在引物上加那些碱基再p一次不就可以了

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赞一下(3人) 回复此楼
4楼2017-07-03 18:51:54
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