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眉间芳华

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助!基因克隆不出来,要疯了 已有13人参与

各位大神好,本人菜鸟一枚,最近在克隆基因。基因长1770bp,已经p出了1700多了,但是atg后面的36bp一直出不来,尝试了pfu、taq、extaq、longamp酶。在启动子和基因内部设计引物,p了500bp,发现atg那段的引物设计的也没问题,但就是p不出来全长?~~~已经做了三个多月了,最近总挨老板骂~~·希望有经验的高手们给点建议。小女子不甚感谢~

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hzlatqh

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议先把模版测序看看是否有那个36bp的片段。很可能模版本身就缺少那个片段。

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两个黄鹂鸣翠柳,一行白鹭上青天
11楼2017-07-06 06:35:58
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collins_1

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
为什么是只有一个小段没有p出来呢?
坚持不懈
2楼2017-07-03 15:06:01
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不日骑士殿

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
测序结果没显示那一段吗?如果后引物没问题,正常来说顺序扩增应该是可以扩出来的呀。
3楼2017-07-03 16:46:24
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六维空想

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你直接在引物上加那些碱基再p一次不就可以了

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4楼2017-07-03 18:51:54
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