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拿下英语

金虫 (著名写手)

11楼2017-07-01 13:04:43
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钱塘幼麟

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by demonhb at 2017-06-30 09:22:45
程序错了吧,怎么会退火时间7分钟,而延伸时间才30秒,反了吧,你这酶不可能30秒能延伸6000bp吧

对,我打错了。延伸时间7分钟,退火30秒。
12楼2017-07-27 09:51:23
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钱塘幼麟

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-29 20:33:09
没用过Gibson Assembly Mix这个试剂盒。我一般是把载体单酶切或双酶切,然后和两端带有同源序列的PCR产物进行Gibson cloning。如果你是用PCR方法扩增质粒的话,注意你的引物,看看有没有问题。还有就是,你用质粒做 ...

请问:在用Gibson Assembly 之前,是不是要把载体质粒先切开?
13楼2017-07-27 09:53:00
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wallee

新虫 (初入文坛)

14楼2017-07-27 16:17:21
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伤何处

木虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 钱塘幼麟 at 2017-07-27 09:53:00
请问:在用Gibson Assembly 之前,是不是要把载体质粒先切开?...

有两种方法把载体线性化,一种是酶切切开,另外一种是PCR扩增。载体酶切用的多一些,因为不涉及PCR的错配之类的。
对也罢,错也罢;正也罢,逆也罢;通途也好,崎岖无妨……但问,吾心坚否?若坚,纵使歧路,以铁心,贯穿而过,亦为大道!不坚,便是坦途,也难登临绝顶,观险峰
15楼2017-07-27 23:55:19
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
16楼2017-08-30 11:51:03
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hua_geduo

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

首先你的片段6000,所用的酶或Mix可以不可以支持这么长片段的PCR反应,其次,你的程序设置错误,退货温度7分钟,延伸时间30秒,设反了吧?
17楼2017-08-31 15:53:58
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生煎包煎饺

新虫 (正式写手)

18楼2018-02-10 12:17:41
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沈点钱好吗

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

19楼2018-05-31 23:21:28
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练练练链球菌

新虫 (小有名气)

楼主 最后这个问题解决了吗

发自小木虫IOS客户端
20楼2022-03-19 14:54:06
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