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颠覆性发现：DNA复制教学视频都是错的！ 已有5人参与
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脱氧核糖核酸(DNA)复制几乎是地球所有生命的基础。如今，科学家们第一次在单个DNA分子尺度观察到了它们的复制。有些令人吃惊的是，DNA复制意想不到地富有随机性。研究人员利用先进成像技术以及极大耐心，观察了大肠杆菌DNA复制，并测量了每股链上酶机器（复制复合体）的运行速度。并且，单股链上DNA复制复合体内部各组件移动速度也并不相同！ DNA复制基本知识 DNA双螺旋由两条相反方向链组成，每股链的基本组成单位为四种脱氧核苷酸，即A、T、C、G。DNA碱基对是两条链上互相匹配的碱基，即A-T，G-C。DNA复制主要包括引发、延伸、终止三个阶段。第一阶段，解螺旋酶将缠绕在一起的双链DNA解成两股单链。让引发酶与单链DNA的“引物序列”结合，启动复制。紧接着，DNA聚合酶附着于引物序列，并向前移动为新链增加碱基。 由于两股双螺旋方向相反，聚合酶在两股链上背道而驰。其中一股被称为先导链，聚合酶连续移动，新链尾随其后。另一股被称为后随链，以相反方向（相对于先导链聚合酶移动方向）结合、移动和脱落，重复循环工作，合成一系列DNA短片段（冈崎片段）。两条链上聚合酶协调工作，复制速度基本保持一致。 常见的教学模式，两股链上的聚合酶和解旋酶等作为一个整体，匀速工作 观察实验 为了研究聚合酶工作情况，研究人员使用环状DNA，通过一条“尾巴”与载玻片连接。当复制机器绕着DNA圈旋转时，尾巴就会变长。研究人员用作为燃料的三磷酸腺苷（ATP）控制DNA复制开和关。用与DNA双链结合的荧光染料点亮不断生长着的DNA螺旋。整个装置位于流式小室，DNA链伸展着看起来像漂浮在微风中的横幅。《Nature》重要成果：对抗癌细胞自我复制的分子奥秘 暂停、启动、变速 观察单个DNA链，研究人员意外地发现，复制的停止并不可预知，并且当它再次启动时竟会改变速度。“前后速度相差10倍，”加州大学戴维斯分校分子遗传学和微生物学教授Stephen Kowalczykowski说。有时，后随链合成停止了，但先导链仍然继续生长。具体现象是在发光链中，这段区域显示黑暗，因为荧光染料不能与DNA单链结合。 “我们发现两股链并非步调一致，相反，它们完全独立工作，”Kowalczykowski说。看似协调步调，实际上是一系列启动、停止、变速的随机过程。延长时间后发现，任意条链都在匀速前进，研究人员同时观察了很多条DNA，发现它们的平均速度相同。 Kowalczykowski将其比作高速公路。“某个点上，车速有快有慢，但当行驶路程足够远时，两台车最后同时到达终点。” 研究人员还发现解旋酶上的“自动刹车”。当聚合酶休息时，解旋酶保持移动，尽可能地使松散DNA展开一个缺口，使其免受伤害。事实上，暴露的单链DNA会发出警报信号，激活修复酶。 当解旋酶与复制复合体失去耦合并开始远离时，它的移动速度减慢了5倍。让从休息中恢复过来的聚合酶慢慢追赶，然后再次加速。 如此随机的工作方式，不禁让人重新思考DNA复制和其他生物化学过程。“这是一个真正的范式转变，这项发现破坏了教科书中大量内容。” 原文标题 Independent and Stochastic Action of DNA Polymerases in the Replisome |
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