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桂桂5708

木虫 (著名写手)

[求助] 总RNA提取效率是否会影响后面的Ct值?已有1人参与

如题,做荧光定量PCR实验,在血清样本中加入一定量的拟南芥,如果提取效率低的话,是否会影响它的Ct值呢?如果提取后的总RNA的纯度和总量不是那么好,那些存在的盐类和蛋白也会影响结果吗?谢谢~~~~~~~~~~~~
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桂桂5708

木虫 (著名写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by yingchao0118 at 2017-06-19 11:51:38
有可能是蛋白或者DNA 你可以跑个胶看一下
...

之前我对比过两种离心温度对提取的影响,发现温度越低,总RNA的量就越少(这个是不是说明提取效率低了?),但是做到后面发现两种离心温度qPCR出来的Ct值却相差不到0.5Ct,这个要如何解释呢?
慷慨丈夫志,生当忠孝门,为官须做相,及第必争先.
16楼2017-06-19 14:02:15
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查看全部 18 个回答

MulanQahar

金虫 (正式写手)

1. 没明白提取效率低的意思。2. 纯度不好的时候,肯定会受影响。但是浓度低的时候,未必会。

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2楼2017-06-15 15:48:03
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MulanQahar

金虫 (正式写手)

在纯度低的时候,因为存在基因组D你A的污染,

发自小木虫Android客户端
3楼2017-06-15 16:00:12
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MulanQahar

金虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-19 11:53:28
DNA 的污染,会出现很多的非特异性的扩增。因而影响Ct value.

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4楼2017-06-15 16:02:49
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