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guoguo201209

新虫 (小有名气)

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[求助] 普通PCR产物进行琼脂糖电泳条带竟然是斜的？！有图提供，请大侠指点！已有7人参与

普通PCR产物进行1%的琼脂凝胶电泳，条带竟然是斜的，TAE缓冲液、电泳仪、电泳槽都换过了，还是这样，实在是找不到原因。以前经常做普通PCR，都很正常。最近怎么会出现这样的现象，请大侠们给解答，谢谢谢谢！

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1楼 2017-06-13 23:48:08

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萤火虫之谷

新虫 (文学泰斗)

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【答案】应助回帖

各种原因都可能。
1. 胶本身的原因。就是胶制作的不均匀（配液时融解的不彻底，或不纯--里面有杂质）--建议重新配一块
2. 胶的制作问题，听过有人误用ddH2O 代替了缓冲液去配胶，也会这样（你自己排出一下）
3..电泳胶的浓度不适合（大部分情况下。0.8-1%的都适用。但你没有提你的DNA时多大的）。
4. 回收的缓冲液（TAE 反复使用，可能会引起这样的问题。你说你已经换了，可以排除）
4. 电泳槽有问题（有的地方链接不好，造成通电不均匀）
5. 温度过高。TAE 对高温度很敏感，温度过高或 run的时间过长，也可能是一个原因。
6.电压：电压过大. 一般情况下，100V／30分，适合大部分DNA片段。但你试一下把电压降到50-60V，跑时间长一点。
7.其他

总而言之，建议重新配TAE、胶，将电压降至60以下，再试一次。

祝你顺利。